หลักการพื้นฐานของการสังเคราะห์ DNA

การสังเคราะห์ DNA ทางเคมีขึ้นอยู่กับกลยุทธ์การสังเคราะห์เฟสของแข็งและเคมีของฟอสโฟรามิไดต์แตกต่างจากการสังเคราะห์ DNA ทางชีววิทยา วัสดุในการสังเคราะห์ DNA ทางเคมีคือ DMT (4, 4-dimethoxytrityl) และ phosphoramidite ดัดแปลง deoxyriboxyside ดังแสดงในรูปที่ 1 การสังเคราะห์ DNA ดำเนินการบนการสนับสนุนที่มั่นคง (เราสามารถนำเสนอต่างๆคอลัมน์การสังเคราะห์โอลิโก) เช่น CPG (แก้วรูพรุนที่ควบคุม) และ PS (โพลีสไตรีน) และการสังเคราะห์ทั้งหมดจะดำเนินการบนเครื่องสังเคราะห์ DNA/RNAซึ่งเป็นอุปกรณ์หลักของเรา มีรูปแบบที่แตกต่างกัน เช่น HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 และอื่นๆ ทิศทางการสังเคราะห์คือจาก 3' ถึง 5' และนิวคลีโอไทด์ถูกนำไปใช้กับการสนับสนุนที่มั่นคงผ่านทางหนึ่ง วงจรการสังเคราะห์โดยทั่วไปวงจรการสังเคราะห์ประกอบด้วยสี่ขั้นตอน ได้แก่ การแยกการป้องกัน การเชื่อมต่อ การกำหนดสูงสุด และการออกซิเดชัน (รูปที่ 2)การกำจัดการป้องกันถูกตั้งค่าให้ลบกลุ่ม DMT บนส่วนรองรับที่เป็นของแข็งหรือกลุ่มไฮดรอกซิล 5' บนนิวคลีโอไซด์ก่อนหน้านี้ กรดไตรคลอโรอะซิติก 3% ในไดคลอโรมีเทนจะถูกใช้เป็นตัวทำปฏิกิริยาในการกำจัดการป้องกันจากนั้นดีออกซีไรบอกซีไซด์ที่ถูกดัดแปลงด้วยฟอสฟอรามิไดต์ได้รับอนุญาตให้สัมผัสกับหมู่ไฮดรอกซิลโดยได้รับความช่วยเหลือจากแอคติเวเตอร์ เช่น 5-เอทิลไทโอเตตราโซล หรือ 4, 5-ไดไซยาโนมิดาโซล ทำให้เกิดฟอสไฟต์ไตรเอสเตอร์ (III) และตระหนักถึงขั้นตอนการเชื่อมต่อขั้นตอนการปิดฝาจะดำเนินการเพื่อปิดกั้นหมู่ไฮดรอกซิลที่ไม่ทำปฏิกิริยาระหว่างขั้นตอนการควบคู่ เพื่อลดการก่อตัวของลำดับข้อบกพร่องที่ไม่ต้องการให้เหลือน้อยที่สุดในที่สุด ฟอสไฟไตรเอสเทอร์ (III) ที่ไม่เสถียรจะถูกออกซิไดซ์เป็นฟอสเฟตไตรเอสเทอร์ที่มีความเสถียรทางเคมี (V) โดยมีไอโอดีนเป็นสารออกซิแดนท์ในปัจจุบันของไพริดีน

DNA ที่สังเคราะห์แล้วสามารถแยกออกได้จากการสนับสนุนที่มั่นคงโดยอะมิโนไลซิส กลุ่มที่มีการป้องกัน 2-ไซยาโนเอทิลบนฟอสโฟไตรเอสเตอร์ และเอไมด์บนนิวคลีโอเบสจะถูกแยกออกในเวลาเดียวกัน แผ่นสังเคราะห์และคอลัมน์การสังเคราะห์ในชั้นวางจะถูกวางโดยตรงในห้องปฏิกิริยา ของอุปกรณ์ป้องปราม.DNA ดิบสามารถเตรียมได้โดย HPLC, อิเล็กโตรโฟรีซิส และ OPC ตามความต้องการ นอกจากนี้เรายังสามารถจัดเตรียมให้คุณได้อีกด้วยอุปกรณ์ทำให้บริสุทธิ์สำหรับการประมวลผลภายหลัง