ปัจจัยที่กำหนดประสิทธิภาพการสังเคราะห์ DNA

ในกระบวนการสังเคราะห์ DNA, RNA และกรดนิวคลีอิกที่ไม่เป็นธรรมชาติโดยทั่วไป ขั้นตอนการกำจัดหมู่ป้องกันและการเชื่อมต่อมีบทบาทสำคัญอย่างยิ่ง

ขั้นตอนการกำจัดหมู่ป้องกัน (Deprotection) คือการกำจัดหมู่ DMT บนตัวรองรับของแข็งหรือหมู่ไฮดรอกซิล 5' บนนิวคลีโอไซด์ก่อนหน้าด้วยกรดอินทรีย์ เพื่อให้หมู่ไฮดรอกซิลเปิดออกสำหรับขั้นตอนการเชื่อมต่อต่อไป โดยส่วนใหญ่จะใช้กรดไตรคลอโรอะซิติก 3% ในไดคลอโรมีเทนหรือโทลูอีนในการดำเนินการขั้นตอนการกำจัดหมู่ป้องกัน ความเข้มข้นของกรดไตรคลอโรอะซิติกและเวลาในการกำจัดหมู่ป้องกัน (เวลาปลดบล็อก) มีผลต่อความบริสุทธิ์ของผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้าย ความเข้มข้นต่ำและเวลาปลดบล็อกไม่เพียงพอจะทำให้มีหมู่ DMT ที่ไม่ทำปฏิกิริยาเหลืออยู่ ซึ่งจะลดผลผลิตและเพิ่มสิ่งเจือปนที่ไม่พึงประสงค์ ในทางกลับกัน เวลาปลดบล็อกที่นานเกินไปอาจทำให้เกิดการสูญเสียพิวรีนของลำดับที่สังเคราะห์ขึ้น ทำให้เกิดสิ่งเจือปนที่ไม่คาดคิดขึ้นได้

ขั้นตอนการเชื่อมต่อมีความไวต่อปริมาณน้ำในตัวทำละลายและความชื้นในอากาศ ความเข้มข้นของน้ำในการสังเคราะห์ควรน้อยกว่า 40 ppm และจะดีกว่าหากน้อยกว่า 25 ppm เพื่อรักษาสภาพการสังเคราะห์แบบปราศจากน้ำ การสังเคราะห์กรดนิวคลีอิกควรดำเนินการในสภาพแวดล้อมที่มีความชื้นต่ำ ดังนั้นเราจึงแนะนำให้ลูกค้าของเราใช้ตัวทำละลายที่มีความชื้นต่ำอุปกรณ์ละลายอะมิไดต์ซึ่งสามารถละลายฟอสโฟราไมไดต์ชนิดผงหรือชนิดน้ำมันในอะซีโตไนไตรล์ปราศจากน้ำ เพื่อหลีกเลี่ยงการสัมผัสกับอากาศ